一、HPLC全称高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography),是一种快速的分离分析技术。HPLC具有高效、高速、高灵敏度、适用范围广和流动相选择范围广等特点,因而发展迅速,并在医药、食品、化妆品和农药等很多行业有着广泛的应用。

二、HPLC峰形

HPLC分析过程中,由于各种原因,经常会出现一些异常峰形,严重影响对结果的分析,给实验人员带来很大的困扰。下面介绍一些常见的峰形以及可能的原因:

1. 未出峰

可能的原因:

a. 未成功进样,或样品未溶解进溶剂中,或样品分解变质或样品浓度太低;

b. 仪器本身的问题:泵或者检测器故障;

c. 流动相选择不合适,如对于反相硅胶柱来说,若流动相极性太大,是冲不下来一些小极性的物质的,物质一直保留在柱子中,因而不出峰。

d. 检测器不合适,如:有些产品没有紫外吸收或者吸收很弱,但是检测还使用了UV检测器2.平头峰

可能的原因:

a. 样品浓度过大或进样体积太大,这个也是大多数原因

b. 检测器设置不正确

可能的原因:

a. 流动相吸收本底值过高

b. 进样过程中进入空气

c. 样品组分的吸收低于流动相

d. 配制样品的溶剂与流动相不一致4.肩峰

可能的原因:

a. 进样量过大;样品浓度过高

b. 保护柱或色谱柱柱头堵塞

c. 保护拄或色谱柱污染或失效

d. 色谱柱柱头塌陷

5.裂峰

可能的原因:

a. 溶剂效应:溶解样品用的溶剂和起始流动相极性相差太大

b. 保护柱或色谱柱柱头堵塞

c. 保护拄或色谱柱污染或失效

d. 色谱柱柱头塌陷

6.鬼峰

鬼峰(ghost peak)是在某个谱图里出现,可能同样的条件再做一次又不出现了,时有时无的峰。

可能的原因:

a. 进样阀残余峰,在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统

b. 样品中存在未知物,改进样品的预处理

c. 流动相污染,更换新流动相(或者换品牌);尽可能现配现用,隔夜的流动相再次使用时要过滤

d. 流路中有小的气泡,打开Purge阀,加大流速排除7. 前伸峰

可能的原因:

a. 进样量或样品浓度高

b. 溶解样品的溶剂比流动相极性强

c. 保护拄或色谱柱污染或失效

d. 流动相不合适,更换新流动相(调pH或换种类、比例等)

8. 拖尾峰

可能的原因:

a. 进样量或样品浓度高

b. 流动相不合适,更换新流动相(调pH或换种类、比例等)

c. 硅羟基作用:加入三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值,钝化样品

d. 柱内烧结不锈钢失效:更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

e. 色谱柱柱头塌陷或柱效下降:更换色谱柱

注:除以上异常峰形外,HPLC检测过程中,还有很多其它情况,小伙伴们可以从仪器本身、流动相、固定相(色谱柱)、柱温和等度与梯度方法学等方面,调整参数,最终找到一种最合适的HPLC方法。